如何定量檢測cAMP和cGMP

　　1958年Sutherland發(fā)現(xiàn)了cAMP(環(huán)磷酸腺苷)，并因此獲得了1971年諾貝爾生理與醫(yī)學獎[1]. 1963年Ashman發(fā)現(xiàn)了cGMP(環(huán)磷酸鳥苷)[2]。50年過去了，人們已明白cAMP、cGMP是在很多生理過程中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用的第二信使分子。鳥苷酸環(huán)化酶可將GTP催化生成cGMP，cGMP可以被磷酸二酯酶水解成GDP。激活鳥苷酸環(huán)化酶和抑制磷酸二酯酶可以增加細胞內(nèi)cGMP的含量。cGMP特異性磷酸二酯酶的抑制劑被用來治療人類的某些疾病，比如cGMP特異性磷酸二酯酶類型5的抑制劑(偉哥和西力士)被用來治療ED(勃起功能障礙);腺苷酸環(huán)化酶將ATP催化生成cAMP，cAMP可以被磷酸二酯酶水解成ADP。激活腺苷酸環(huán)化酶和抑制磷酸二酯酶可以增加細胞內(nèi)cAMP的含量。腺苷酸環(huán)化酶激活受體的阻斷劑和cAMP特異性磷酸二酯酶的抑制劑被用來治療人類的某些疾病，比如針對升高cAMP水平的b-腎上腺素受體的阻斷劑被用于治療心律失常、高血壓、心肌梗塞和心力衰竭等疾病。

　　在五十年的研究歷程中，從開始研究cAMP，cGMP在各種生理過程中的調(diào)節(jié)作用，到近幾年與之相關(guān)的藥物研發(fā)，藥物篩選領(lǐng)域，人們一直在努力尋找一種快速、靈敏、特異性和可重復(fù)地定量檢測cAMP和cGMP含量的方法。

　　檢測方法演變

　　cAMP，cGMP分子量分別只有329.21和345.21，在機體內(nèi)的含量極低，為p mol/L級別，用一般的分析方法無法測定。70年代一系列測定cAMP和cGMP的方法被發(fā)明出來，最基本的原理有三種：分別是競爭性蛋白質(zhì)結(jié)合分析法[3]、放射性免疫分析法[4]和薄層色譜法[5]。在80年代，放射性免疫分析法得到了廣泛的應(yīng)用和改進，由于這種方法采用放射性核素標記，應(yīng)用范圍受到一定限制，為了進一步提高檢測的靈敏度和操作的安全性，進入90年代又陸續(xù)發(fā)明了各種酶標記法和化學發(fā)光法的競爭性ELISA檢測試劑盒，這一類檢測方法的根本原理都是基于抗體抗原的免疫反應(yīng)，所有這些試劑盒中采用的抗體全部是兔抗血清或者是經(jīng)過特異親和提純之后的抗cAMP或cGMP的兔多抗，毫無疑問，兔多抗在約四十年的cAMP，cGMP定量檢測中做出了巨大貢獻，但同時它也有著明顯的缺陷：

　　1，兔多抗對cAMP，cGMP的特異性不高，會與其他核苷類似分子發(fā)生交叉反應(yīng)，盡管可以通過特異親和提純降低交叉，但仍然無法消除交叉;

　　2，兔多抗對cAMP和cGMP的親和力受高濃度的二價陽離子(比如Mg2+和Ca2+)的影響;

　　3，兔多抗在制備的過程中存在個體差異和批間差異，難以保證檢測數(shù)據(jù)的重復(fù)性;

　　4，兔多抗試劑盒在cAMP，cGMP樣品的處理上也需要進行乙�；�處理，這與兔多克隆抗體制備方法有必然關(guān)系，如果不乙�；瘜�無法達到檢測所需的靈敏度。

　　所以無論標記方法如何革新，不改進抗體，仍然不能從根本上迎來cAMP，cGMP定量檢測的變革。