免疫組化實(shí)驗(yàn)操作

　　免疫組化實(shí)驗(yàn)操作

　　60℃烤片2小時(shí)

　　脫蠟。二甲苯脫蠟15分鐘，三次

　　水化。依次經(jīng)過無水乙醇、95%、90%、80%、70%，各2分鐘，蒸餾水(或自來水)5分鐘

　　PBS洗5分鐘，三次

　　3%雙氧水封閉20分鐘，PBS洗5分鐘，三次

　　抗原修復(fù)。枸櫞酸緩沖液(約92-95℃)煮沸(沸水浴)修復(fù)15分鐘，自然涼至室溫。PBS洗5分鐘，三次

　　正常山羊血清封閉，37℃15-20分鐘

　　一抗孵育，4℃過夜.

　　復(fù)溫20分鐘，PBS洗5分鐘，三次

　　二抗孵育，37℃20分鐘(二抗為生物素標(biāo)記的羊抗兔IgG)，PBS洗5分鐘，三次

　　三抗孵育，37℃20分鐘(三抗為辣根酶標(biāo)記的鏈酶親和素)，PBS洗5分鐘，三次

　　DAB顯色，鏡下觀察結(jié)果，適時(shí)終止

　　蘇木素復(fù)染5分鐘，自來水沖洗片刻，75%的鹽酸酒精溶液分化30秒，自來水沖洗5分鐘藍(lán)化

　　脫水。依次經(jīng)過70%、80%、90%、95%、無水乙醇，各2分鐘，二甲苯15分鐘，三次

　　封片，中性樹膠封片