少妇搡BBBB搡BBB搡爱恋,亚洲一区二区 成人网站戴套,激情婬乱A片AAA毛片97,影音先锋成人资源AV在线观看

兩種裂解液的成分和配制步驟

[2013/9/25]

  細(xì)胞裂解液的成分包括了Tris-HCl、EDTA 和NaCl。組織裂解液的成分主要是 Urea、thiourea、CHAPS 等。除了蛋白提取裂解液外,上述兩種裂解液在一些實(shí)驗中的用途也不可小覷。本文介紹這兩種裂解液的配方和配制過程。

  組織裂解液配方:`

  7M Urea(60. 06) 4.2042 g

  2M thiourea(76.12) 1.5224 g

  100mM DTT 0.1543 g

  4% CHAPS 0.4 g

  0.5mM EDTA 0.00146 g

  40Mm Tris 0.0485 g

  2%(v/v) NP-40 0.2 ml

  1%(v/v) Triton X-100 0.1 ml

  5mM PMSF用前加 0.00871 g

  2%pharmalyte 0.2ml

  共10ml分裝成400µl/每管(可應(yīng)用于30-80毫克組織裂解)

  注:已配好分裝成400µl/每管可供應(yīng)用

  不需另配!!!

  細(xì)胞裂解液配方:

  6M Urea(60. 06) 1.8018 g

  2M thiourea(76.12) 0. 7613 g

  65mM DTT 0.050 g

  4% CHAPS 0.2 g

  40Mm Trisbase 0.02425 g

  共5ml分裝成200µl/每管(可應(yīng)用于50-100ml培養(yǎng)瓶內(nèi)的細(xì)胞裂解)

  1、溶液準(zhǔn)備

  2×樣品緩沖液:130mM Tris-HCl ( pH8.0 ) , 20% ( v/v ) 甘油 , 4.6% ( w/v ) SDS , 0.02% 溴酚藍(lán) , 2% DTT

  PBS ( pH7.4 ) :10mM Na2HPO4 , 1.8mM KH2PO4 , 50mM NaCl , 2.7mM KCl

  RIPA緩沖液:50mM Tris-HCl(pH7.4) , 150mM NaCl , 1mM EDTA , 1%Triton×100 , 1%去氧膽酸鈉 , 0.1%SDS , 1mM PMSF , 1μg/ml 牛胰蛋白酶抑制劑 ( aprotinin ) , 1μg/ml亮抑蛋白酶肽 ( leupeptin )

  裂解液緩沖液:10mM Tris-HCl(pH7.4) , 0.15M NaCl , 5mM EDTA(pH8.0) , 1%Triton×100;使用前加5mM DTT,0.1mM PMSF異丙醇和5mM ε-氨基己酸

  2、裂解液的制備

  制備細(xì)胞裂解液:

  收集胰蛋白酶消化的細(xì)胞并離心,用PBS清洗。

  用100μl RIPA緩沖液冰浴溶解沉淀10min(每500000個細(xì)胞20μl RIPA緩沖液)。

  10000rpm,4℃離心10min,取上清轉(zhuǎn)移至新管。

  用考馬斯亮藍(lán)法檢測蛋白質(zhì)濃度。

  用裂解緩沖液將溶液濃度調(diào)到5mg/ml,每小瓶中放100μl,-80℃儲存。

  按照1:1體積比混合2×樣品緩沖液,煮沸5min后,室溫放置5min。

  短時離心后點(diǎn)樣電泳檢測。

  制備組織裂解液:

  在制備過程中一直將溶胞液或組織放在冰上。

  切開組織,稱取組織1.5g于PBS中清洗。

  在RIPA緩沖液中剪碎組織后,轉(zhuǎn)移到勻漿器中,加足5ml RIPA緩沖液,研磨20min。

  將研磨液轉(zhuǎn)移到1.5ml的離心管中,14000rpm,4℃離心10min。

  取上清液作為完整的組織裂解液。

  用考馬斯亮藍(lán)法測定蛋白質(zhì)濃度。

  用裂解緩沖液將溶液濃度調(diào)到5mg/ml,每小瓶中放100μl,-80℃儲存。

  按照1:1體積比混合2×樣品緩沖液,煮沸5min后,室溫放置5min。

  短時離心后點(diǎn)樣電泳檢測。

  需要注意的是,為了減少以及杜絕核酸降解,樣品被徹底勻漿之前的步驟需要多加留意。還有就是短時離心后點(diǎn)樣電泳檢測。讓樣品從脫離原來的生存環(huán)境的時間盡量縮短

免费 无码吹在线观看 | 老司机免费视频福利一区二区 | 欧洲无码A片人妻久尤物伊曼纽尔 | 国产无码精品视频 | 撒尿视频一区二区三区 | 嫖胖老熟女双飞88AV | 国产强伦轩免费视频在线 | 男操女爱爱视频免费看 | 公与妇伦厨房在线播放 | 91人人澡人人爽人人模 | 91亚洲精品无码成人久久久 | 成人h精品动漫一区二区三区 | 青草综合一区二区三区 | 一级91毛片特大毛片 | 亚洲国产精品成人AV | 91丨日韩丨白浆秘 3D | 91人妻人人澡人人爽 | 最新在线播放网页aaa | 白丝诱惑一区二区三区 | 久久久蜜桃一区二区人 | 在线中文字幕无码 | 成人动漫一区二区 | 极品人妻系列少妇系列专区 | 美女裸体视频免费观看久久 | 日韩电影免费在线观看 | 观看成人污污免费网站入口 | 一级婬片A级试看26分钟 | 东北女人无套内谢毛片 | 一边膜上面一边膜下面 | 国产91看片婬黄大片 | 强行糟蹋人妻HD中文字幕动漫 | 国产一级一级毛片 | 亚洲一区二区三区入口 | 少妇大叫太粗太大爽一区二区 | 国产99视频在线观看 | 女生自慰一级看片 | 国产亲子伦XXXXX熟妇91 | 自拍日韩亚洲一区在线 | 激情小说激情图片 | 高潮白浆美女自慰网站 | 黄色三a三级国产色情无码 熟妇人妻中文字幕av无码 |