如何正確的選擇Flag標(biāo)簽抗體

　　在免疫沉淀IP&免疫熒光IF如何正確的選擇Flag標(biāo)簽抗體?

　　Flag標(biāo)簽系統(tǒng)是已被公認(rèn)的用于表達(dá)、純化以及檢測融合蛋白的表達(dá)系統(tǒng)，廣泛應(yīng)用于Western blotting、免疫細(xì)胞組化、免疫共沉淀、流式細(xì)胞術(shù)、蛋白純化以及蛋白相互作用、蛋白分離等多個(gè)研究領(lǐng)域。Flag標(biāo)簽是一個(gè)與重組蛋白相融合的由8個(gè)親水氨基酸(Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys)組成的多肽片斷。FLAG標(biāo)簽只有8個(gè)氨基酸組成，因此它不會(huì)占據(jù)其他表位與結(jié)合域，避免導(dǎo)致融合蛋白的功能、分泌性以及轉(zhuǎn)運(yùn)發(fā)生改變。由于它的親水性特點(diǎn)，F(xiàn)LAG標(biāo)簽傾向于定位在融合蛋白表面，因此更易與抗體結(jié)合以及被腸激酶酶解。

　　由于Flag標(biāo)簽可位于蛋白質(zhì)的C端或N端，這一系統(tǒng)已用于各種細(xì)胞類型，包括細(xì)菌、酵母和哺乳細(xì)胞。由于Flag標(biāo)簽系統(tǒng)的純化條件是非變性的，因此可以純化所有有活性的融合蛋白。EarthOx的Anti-Flag Tag Monoclonal Antibody(貨號#E022060)可以用于檢測和Flag標(biāo)簽融合表達(dá)蛋白的表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)定位，以及純化、定性或定量檢測Flag融合表達(dá)蛋白等。比如在免疫熒光IF的實(shí)驗(yàn)里，同時(shí)配合EarthOx的Dylight 549熒光二抗，使用該抗體可以準(zhǔn)確的定位出Flag融合表達(dá)蛋白在細(xì)胞內(nèi)的位置(如圖紅色顯示部分)。另外，做融合表達(dá)分析前，通過免疫共沉淀技術(shù)獲得Flag融合表達(dá)蛋白也是非常重要的一步，因此選擇一個(gè)合適的、可用于免疫共沉淀(Immunoprecipitation，IP)Flag標(biāo)簽抗體也是很必要的。EarthOx的Anti-Flag Tag Monoclonal Antibody(貨號#E022060)不僅能應(yīng)用于細(xì)胞內(nèi)定位的IF實(shí)驗(yàn)，同樣還能應(yīng)用于IP實(shí)驗(yàn)。1:200甚至更高的IP實(shí)驗(yàn)稀釋比率，也說明了該抗體本身的具有很高的效價(jià)，同時(shí)，因?yàn)槭菃慰寺】贵w，因此特異性也很高。高效價(jià)所對應(yīng)的高稀釋比率也意味著超高性價(jià)比。

　　除了上面所說的IP和IF實(shí)驗(yàn)，F(xiàn)lag標(biāo)簽抗體的基本應(yīng)用還包括WB實(shí)驗(yàn)，EarthOx的Anti-Flag Tag Monoclonal Antibody(貨號#E022060)在該應(yīng)用中同樣表現(xiàn)優(yōu)異。說明書的推薦起始稀釋比例是1:1000，但在如上圖所示的實(shí)驗(yàn)中，在1:10000的稀釋比率下也表現(xiàn)優(yōu)異(EarthOx也進(jìn)行了50000次以后的稀釋，仍然顯示出很好的條帶顯示，沒有在說明書里列出)。因此EarthOx的Flag標(biāo)簽抗體不但能通過WB實(shí)驗(yàn)很好的滿足融合蛋白表達(dá)量的分析，并且在免疫熒光IF、免疫沉淀IP的試驗(yàn)中也有很好的表現(xiàn)，能滿足Flag標(biāo)簽融合蛋白的細(xì)胞內(nèi)定位以及純化的需要，而且其高效價(jià)和特異性，遠(yuǎn)遠(yuǎn)比其他Flag抗體具有更高的性價(jià)比