什么是流式細(xì)胞技術(shù)

　　流式細(xì)胞技術(shù)(flow cytometry,FCM)是利用流式細(xì)胞儀進(jìn)行的一種單細(xì)胞定量分析和分選技術(shù)。流式細(xì)胞術(shù)是單克隆抗體及免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、激光和電子計(jì)算機(jī)科學(xué)等高度發(fā)展及綜合利用的高技術(shù)產(chǎn)物。

　　流式細(xì)胞儀的基本結(jié)構(gòu)和工作原理：流式細(xì)胞儀由三部分構(gòu)成 1.傳感系統(tǒng)，包括樣本遞送系統(tǒng)、樣品池、檢測(cè)系統(tǒng)、電子傳感器和激光源等;2.計(jì)算機(jī)系統(tǒng);3.電路、光路和水路系統(tǒng)，有電源、光學(xué)傳導(dǎo)和濾片、鞘液循環(huán)和回收部分等。流式細(xì)胞儀的工作原理是使懸浮在液體中分散的經(jīng)熒光標(biāo)記的細(xì)胞或微粒逐個(gè)通過樣品池，同時(shí)由熒光探測(cè)器捕獲熒光信號(hào)并轉(zhuǎn)換成分別代表前向散射角、側(cè)向散射角和不同熒光強(qiáng)度的電脈沖信號(hào)，經(jīng)計(jì)算機(jī)處理形成相應(yīng)的點(diǎn)圖，直方圖和加三維結(jié)構(gòu)圖像進(jìn)行分析。用于FCM的樣本是單細(xì)胞懸液，可以是血液、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)液、各種體液、新鮮實(shí)體瘤的單細(xì)胞懸液以及石蠟包埋組織的單細(xì)胞懸液等。

　　樣本制備的基本原則：1.使各種液體和懸浮細(xì)胞樣本新鮮，盡快完成樣本制備和檢測(cè);2.針對(duì)不同的細(xì)胞樣本進(jìn)行適當(dāng)洗滌、酶消化或EDTA處理，以清除雜質(zhì)，使粘附的細(xì)胞彼此分離而形成單細(xì)胞狀態(tài);3.對(duì)新鮮實(shí)體瘤組織可選用或聯(lián)用酶消化法，機(jī)械打散法和化學(xué)分散法來(lái)獲得足夠數(shù)量的單細(xì)胞懸液;4.對(duì)石蠟包埋組織應(yīng)先切成若干40-50um厚的蠟片，經(jīng)二甲苯脫蠟到水后，再用前述方法制備單細(xì)胞懸液;5.單細(xì)胞懸液的細(xì)胞數(shù)不應(yīng)少于10個(gè)。

　　流式細(xì)胞技術(shù)的應(yīng)用：1.其測(cè)定細(xì)胞內(nèi)DNA的變異系數(shù)最小，一般在2%以下;2.能準(zhǔn)確地進(jìn)行DNA倍體分析;3.借助于熒光染料進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)和核酸的定量研究;4.快速進(jìn)行細(xì)胞分選和細(xì)胞收集;5.醫(yī)學(xué)應(yīng)用：免疫功能研究各種干細(xì)胞的檢測(cè)，癌癥病人的多藥耐藥性，細(xì)胞功能及代謝動(dòng)力學(xué)研究，血小板分析(心血管疾病)，流式細(xì)胞術(shù)與分子生物學(xué)研究。