免疫電鏡技術(shù)組織的固定

    Singer于1959年首先建立了用電子密度較高的鐵蛋白(ferritin)標(biāo)記抗體的方法，可對細(xì)胞表面抗原進(jìn)行超微結(jié)構(gòu)定位。該技術(shù)為免疫電鏡技術(shù)的發(fā)展奠定了基礎(chǔ)。Nakane與Pierce于1968年成功建立了免疫酶標(biāo)記電鏡技術(shù)，使細(xì)胞內(nèi)抗原的超微結(jié)構(gòu)定位成為可能。Faulk和Taylor于1971年提出用膠體金(colloidalgold)標(biāo)記抗體，并首先用于免疫電鏡研究，由此大大促進(jìn)了免疫電鏡技術(shù)的發(fā)展。

    免疫電鏡技術(shù)的取材要求更迅速更精細(xì)。與電鏡酶細(xì)胞化學(xué)標(biāo)本制備相似，既要求保存良好的細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)，同時又要保持組織細(xì)胞的抗原性，但是，兩者間往往處于矛盾之中，也就是說，強(qiáng)固定劑雖有利于超微結(jié)構(gòu)的保存，但易導(dǎo)致抗原性明顯減弱，所以免疫電鏡的組織標(biāo)本固定不僅要考慮超微結(jié)構(gòu)的保存，亦應(yīng)盡力保持其抗原性，故應(yīng)選用較溫和的固定劑。常用固定劑有過碘酸―賴氨酸―多聚甲醛(periodate-lysine-paraformaldehyde，PLP)液和2％多聚甲醛―0．5％戊二醛混合液。在包埋前染色中，PLP較為常用，該固定液較適用于含糖類豐富的組織，對超微結(jié)構(gòu)及許多抗原活性保存較好。因為PLP中的過碘酸能氧化糖類，使其中的羥基轉(zhuǎn)變?yōu)槿┗�，賴氨酸的雙價氨基與醛基結(jié)合從而把抗原交聯(lián)起來。

    因組織抗原絕大多數(shù)含蛋白質(zhì)和糖類。而抗原表位一般位于蛋白部分。PLP能選擇性地使糖類交聯(lián)，這樣既穩(wěn)定了抗原，又不影響抗原表位與抗體的結(jié)合。加入低濃度的多聚甲醛則能穩(wěn)定蛋白與脂類。但賴氨酸較貴，而多聚甲醛/戊二醛固定液相對經(jīng)濟(jì)簡便，效果也較理想。